2023年5月2日，接國家知識產權局通知，首都醫(yī)科大學附屬北京佑安醫(yī)院任鋒教授團隊獲批CRISPR技術在HBV cccDNA檢測領域的第一項發(fā)明專利——“基于PCR-CRISPR-cas13a檢測乙型肝炎病毒共價閉合環(huán)狀DNA的試劑盒”（圖1）。

圖1 “基于PCR-CRISPR-cas13a檢測乙型肝炎病毒共價閉合環(huán)狀DNA的試劑盒”發(fā)明專利證書

HBV感染是影響全世界人民健康的主要公共衛(wèi)生問題，有超過2.5億的HBV感染者。主要的抗病毒藥物如核苷（酸）類似物（NAs）和α干擾素（IFNα）等都不能完全治愈HBV，根本原因在于不能徹底清除的共價閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）。HBV cccDNA是病毒RNA復制轉錄的模板，它以微染色體的形式長期穩(wěn)定的存在于肝細胞核中。因此，建立一種有效的HBV cccDNA檢測方法，對于臨床抗病毒治療效果的評價和治療策略的調整都具有重要意義。目前，檢測HBV cccDNA的方法有Southern印跡雜交、巢式PCR、RCA和微滴數(shù)字PCR（ddPCR），但由于這些方法存在操作復雜、靈敏度低和成本較高等局限性沒有被廣泛使用。

規(guī)律成簇的間隔短回文重復序列及其相關蛋白（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated proteins， CRISPR/Cas）是大多數(shù)細菌及古細菌中抵御病毒入侵的一種獲得性免疫方式。CRISPR/Cas系統(tǒng)介導的免疫機理：當病毒首次入侵時，細菌會將病毒的小片段DNA整合到自身的CRISPR間隔區(qū)；當病毒再次入侵時，CRISPR轉錄生成一條前體CRISPR RNA（pre-crRNA），pre-crRNA被RNA內切酶切割生成含有與病毒靶標序列匹配的成熟CRISPR RNA（crRNA），該crRNA引導具有核酸內切酶活性的Cas蛋白對靶標序列進行識別和降解?；贑RISPR技術可實現(xiàn)快速、精確、便攜式的核酸診斷，有望成為新一代核酸檢測技術。

首都醫(yī)科大學附屬北京佑安醫(yī)院任鋒教授團隊利用CRISPR新技術并聯(lián)合PCR技術，建立了一種高靈敏性和高特異性檢測HBV cccDNA的新方法，該方法的檢測靈敏度為1copy/μl，優(yōu)于目前現(xiàn)有的檢測方法，針對肝組織進行檢測，陽性符合率為72.5%，高于其他檢測方法。這一方法的廣泛應用將為HBV抗病毒治療的評價和停藥后再復發(fā)監(jiān)測提供重要的指導意義。

這項工作得到了國家自然科學基金、北京市自然科學基金、首都衛(wèi)生發(fā)展科研專項、北京市醫(yī)院管理中心“登峰”人才培養(yǎng)計劃及北京市醫(yī)院管理中心“青苗”人才培養(yǎng)計劃等資助。首都醫(yī)科大學附屬北京佑安醫(yī)院為唯一專利權人，北京肝病研究所任鋒教授、張向穎副教授、段鐘平教授、陳德喜教授等為發(fā)明人。