成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列(CRISPR)/CRISPR相關(guān)系統(tǒng)(Cas)作為一種新型的核酸檢測技術(shù),因其具有高靈敏度和高特異性的獨(dú)特特性,在過去的十年中受到了廣泛關(guān)注并取得了很大進(jìn)展。任鋒教授科研團(tuán)隊近年來利用CRISPR新技術(shù)致力于傳染病相關(guān)病原體核酸檢測新方法的建立與臨床應(yīng)用,研究成果相繼在國內(nèi)學(xué)術(shù)會議中進(jìn)行匯報和交流。
任鋒教授2021級博士研究生田原,在2023年4月成都舉辦的“第三屆中華分子診斷大會”優(yōu)秀論文評選中榮獲“三等獎”,論文的題目是“基于PCR-CRISPR/Cas13a技術(shù)檢測乙型肝炎病毒共價閉合環(huán)狀DNA方法的建立和臨床驗證”。研究通過選定HBV cccDNA跨缺口區(qū)作為擴(kuò)增靶序列,設(shè)計特異性PCR引物、熒光定量PCR探針以及crRNA,建立了基于CRISPR-Cas13a技術(shù)的HBV cccDNA檢測新方法。本研究使用qPCR、PCR-CRISPR、RCA-qPCR、RCA-PCR-CRISPR和ddPCR五種方法對40例HBV相關(guān)病人的肝組織和24例HBV相關(guān)病人的血漿、全血和PBMC進(jìn)行了檢測。結(jié)果表明,RCA-PCR-CRISPR方法對肝組織的檢出率為72.5%,高于其他檢測方法。本研究建立了基于CRISPR/Cas13a的新型檢測方法,可對HBV cccDNA進(jìn)行高靈敏度和特異性檢測,為準(zhǔn)確檢測HBV感染、抗病毒治療評估、治療終點(diǎn)的確定以及調(diào)整治療方案提供了有力的技術(shù)支撐。
任鋒教授2022級博士研究生范子豪,在2023年3月重慶舉辦的“第四屆全國臨床檢驗診斷學(xué)和醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)研究生學(xué)術(shù)論壇”優(yōu)秀論文評選中榮獲“二等獎”,論文的題目是“CRISPR/Cas13a技術(shù)助力乙型肝炎低病毒血癥患者HBV DNA快速便捷檢測”。該研究利用CRISPR/Cas13a檢測新技術(shù),聯(lián)合等溫擴(kuò)增技術(shù)(RAA),建立了基于RAA-CRISPR/ Cas13a的HBV DNA快速、便攜檢測試紙條。這種快速便攜的HBV DNA檢測試紙條將有望迅速擴(kuò)大HBV感染的診斷篩查能力和覆蓋面積,為HBV感染者特別是HBV低病毒血癥患者(LLV)的HBV DNA檢測提供了一種可視化的、快速檢測的替代方案。這將簡化HBV感染患者抗病毒治療效果的驗證過程,有助于解決HBV感染這一全球公共衛(wèi)生問題。
任鋒教授2020級碩士研究生曹亞玲,于2023年6月在青島參加了由中華醫(yī)學(xué)會、中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會主辦的“第六次全國肝病相關(guān)感染學(xué)術(shù)會議”,并在大會中匯報“基于CRISPR/Cas13a技術(shù)的耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌快速檢測新方法的建立及評價”相關(guān)研究。該研究利用CRISPR/Cas13a檢測新技術(shù),聯(lián)合聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、等溫擴(kuò)增技術(shù)(RAA),建立了基于PCR/RAA-CRISPR/ Cas13a檢測耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(CRKP)的方法。通過結(jié)合橫向側(cè)流試紙條技術(shù)實現(xiàn)結(jié)果的可視化。該方法使用PCR/RAA-CRISPR檢測51株臨床樣本,CRKP檢出率可達(dá)到92.16%,這有助于在小型實驗室開展CRKP的檢測工作,在耐藥監(jiān)測、感染控制以及臨床治療指導(dǎo)方面有廣泛的應(yīng)用前景。
CRISPR新技術(shù)被《Nature》認(rèn)為是2022年7大“顛覆性”技術(shù)之一?;贑RISPR技術(shù)可實現(xiàn)快速、精確、便攜式的核酸診斷,其有望成為下一代核酸檢測新技術(shù),尤其是在感染性疾病的診斷上有著極佳的發(fā)展前景。隨著國內(nèi)外CRISPR/Cas相關(guān)分子診斷技術(shù)不斷發(fā)展和優(yōu)化,其應(yīng)用場景將被不斷拓展,有望成為新一代通用型、平臺型的分子診斷技術(shù)。