3月27日至31日，第33屆亞太肝病研究協(xié)會(huì)（Asian Pacific Association for the Study of the Liver，APASL）年會(huì)在日本京都隆重召開(kāi)。來(lái)自亞太地區(qū)的專家學(xué)者歡聚一堂，分享在肝病領(lǐng)域的各項(xiàng)研究進(jìn)展。北京佑安醫(yī)院任鋒教授團(tuán)隊(duì)的一項(xiàng)研究“CRISPR/Cas13a助力精準(zhǔn)便攜的丁型肝炎病毒RNA檢測(cè)”入選大會(huì)口頭報(bào)告，并獲得Travel Award獎(jiǎng)項(xiàng)。

丁型肝炎病毒（HDV）感染加速了慢性乙型肝炎病毒感染（HBV）的進(jìn)展，給患者帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)和健康負(fù)擔(dān)。目前，仍然缺乏準(zhǔn)確和便攜的HDV RNA的檢測(cè)方法。因此，旨在利用CRISPR-Cas13a技術(shù)建立一種方便、快速、高靈敏度和特異性的方法來(lái)檢測(cè)HDV RNA。

本研究首先從HDV數(shù)據(jù)庫(kù)中下載了基因組序列，進(jìn)行了多序列比對(duì)，并設(shè)計(jì)和篩選了CRISPR RNA（crRNA）、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）和反轉(zhuǎn)錄重組酶輔助擴(kuò)增（RT-RAA）引物在保守序列區(qū)域結(jié)合。在使用熱激活處理合成質(zhì)粒和樣本后，分別建立了基于CRISPR-Cas13a結(jié)合RT-PCR和RT-RAA的熒光和側(cè)流條檢測(cè)。臨床血漿樣本通過(guò)基于CRISPR-Cas13a的檢測(cè)得到進(jìn)一步驗(yàn)證。

研究結(jié)果表明，對(duì)于合成的HDV RNA質(zhì)粒，基于RT-PCR-CRISPR的熒光檢測(cè)的靈敏度為1拷貝/μL，高于反轉(zhuǎn)錄定量實(shí)時(shí)PCR（RT-qPCR）（10拷貝/μL）和反轉(zhuǎn)錄飛沫數(shù)字PCR（RT-ddPCR）（10拷貝/μL）；對(duì)于HDV RNA陽(yáng)性樣本，基于RT-RAA-CRISPR的熒光和試紙條檢測(cè)的靈敏度為10 copies/μL，與RT-qPCR和RT-ddPCR一樣低，且檢測(cè)時(shí)間僅約85分鐘。此外，通過(guò)RT-qPCR、RT-ddPCR、RT-PCR-CRISPR熒光和RT-RAA-CRISPR試紙條方法檢測(cè)的抗HDV IgG陽(yáng)性樣本的陽(yáng)性率分別為66.7%（48/72）、76.4%（55/72）、81.9%（59/72）和72.2%（52/72）。

本研究開(kāi)發(fā)了一種高靈敏度和特異性的RT-PCR-CRISPR檢測(cè)方法以及一種基于RT-RAA-CRISPR的便攜式簡(jiǎn)易檢測(cè)方法，可作為一種監(jiān)測(cè)HDV感染的發(fā)生發(fā)展和評(píng)價(jià)治療效果的有效措施。

通過(guò)本次會(huì)議，任鋒教授科研團(tuán)隊(duì)充分展示了課題組的最新研究成果，并通過(guò)此次發(fā)言增加了與國(guó)內(nèi)外專家充分交流的機(jī)會(huì)。此外，通過(guò)此次盛會(huì)任鋒教授科研團(tuán)隊(duì)也了解了肝病的最新研究動(dòng)向，分享了目前肝病領(lǐng)域最新研究成果，學(xué)習(xí)了肝病領(lǐng)域最先進(jìn)科研技術(shù)方法，這些都為該團(tuán)隊(duì)的科研發(fā)展起到了很好的指導(dǎo)作用。